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空肠弯曲菌的活化与保藏

发布时间: 2021-03-26

空肠弯曲菌(Campylobacter jejuni)是一种可以引起人类急性肠炎和食物中毒的人畜共患病原菌。该菌培养条件苛刻,生长需要特定的环境,菌株不易保存。通常在微需氧(5%氧气、85%氮气、10%二氧化碳)、42±1℃环境下,可存活4~5d,最后因培养基表面干燥而导致菌体干燥死亡。


空肠弯曲菌的活化与保藏


一、空肠弯曲菌的活化方法


1.配制弯曲菌活化肉汤


空肠弯曲菌的活化与保藏


a. 将各成分溶于蒸馏水中,经过0.22μm滤膜过滤除菌。FBP 根据需要量现用现配,在-70℃储存不超过3个月或-20℃储存不超过1个月。


b. 裂解脱纤维羊血提前从-70℃冰箱取出恢复至室温。


c. 称取CM125布氏肉汤并溶解灭菌,灭菌后冷却至室温。每100ml基础加入5ml裂解脱纤维羊血和0.5ml FBP溶液,分装试管,即制备完成。

空肠弯曲菌的活化与保藏


2.肉汤培养

从-70℃冰箱取出弯曲菌冻存甘油管,倾倒至弯曲菌活化肉汤中。置于厌氧培养罐中,加入微需氧产气袋于42℃培养24h。


3.平板培养

取10ul肉汤培养物划线至哥伦比亚血平板(PB003A),42℃微需氧培养44±4h,观察菌落形态。典型菌落为灰色、扁平、湿润有光泽,呈沿接种线向外扩散的倾向。

空肠弯曲菌的活化与保藏


4菌株验证

通过菌落形态和生化实验对菌株进行验证,确认后进行菌株保藏。

二、空肠弯曲菌的保藏方法


1.双倍布氏肉汤甘油保存管制作:称取5.62g CM125布氏肉汤干粉,溶于70ml蒸馏水、30ml甘油中,灭菌后冷却至室温,加入5ml裂解脱纤维羊血、0.5ml FBP溶液,混匀后分装到冻存管中,每管1ml。


空肠弯曲菌的活化与保藏


2.使用接种环刮取哥伦比亚血平板上的纯菌落(尽可能多)至冻存管中,涡旋震荡5s,于-70℃长期保存。



三、注意事项


01

不建议使用磁珠管保藏弯曲菌,存活率不如甘油冻存管。

02

-20℃保存的效果不如-70℃冰箱,如果使用-20℃保存,应半年进行一次传代。

03

如果短期保存,可将厌氧罐同试管/平板放入2-8℃冰箱,一星期内使用。



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MSS样本管理系统扫码装置及专用冻存管


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参考文献:

1. 陈晶晶.弯曲菌肠炎[J].中华流行病学杂志, 1986, 7 (4) :245-249

2. 栾军, 祝长青, 蒋原, et al..空肠弯曲菌保存方法的比较[J].口岸卫生控制, 2006, 12(4):15-17.

3. 栾军, 祝长青, 蒋原, et al. 空肠弯曲菌选择性增菌培养和分离方法的比较[J]. 中国人兽共患病学报, 2008, 24(002):117-119.

4. GB4789.9-2014 食品安全国家标准 食品微生物学检验 空肠弯曲菌检验[S].